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　　光催化材料是一類在特定波長光線照射下，自身不發生永久性消耗，卻能通過光生載流子的產生與遷移，催化周圍化學反應的功能性材料。光催化材料的抗病毒活性，是指其在光照射下，通過上述光催化反應產生的活性氧物種，破壞病毒結構、抑制病毒復制，最終實現病毒失活的能力。光催化材料抗病毒活性檢測有哪些方法步驟？

　　光催化材料抗病毒活性檢測方法步驟

　　1.樣品準備階段

　　制備光催化材料樣品：將光催化材料制成標準尺寸的試件，或制備光催化涂層；

　　樣品預處理：用無菌水或磷酸鹽緩沖液（PBS）清洗樣品表面，去除雜質，然后在無菌環境中干燥，確保樣品表面無微生物污染；

　　病毒懸液制備：在細胞培養瓶中培養目標病毒，待病毒增殖至對數期后，用細胞維持液稀釋病毒，制備成濃度為10?~10?PFU/mL的病毒懸液，備用。

　　2.病毒接種與孵育

　　取0.1mL病毒懸液均勻滴加在光催化材料樣品表面，用無菌蓋玻片輕輕覆蓋，使病毒懸液與樣品表面充分接觸（避免懸液干燥）；

　　設置對照組：①空白對照組（無材料，僅病毒懸液）；②無光對照組（光催化材料+病毒懸液，但置于黑暗環境，排除材料本身的物理吸附作用）；③陽性對照組。

　　將所有樣品（含對照組）置于37℃、5%CO?的培養箱中孵育1小時，使病毒充分吸附。

　　3.光催化作用階段

　　按照實驗設計的光源條件，對光催化材料樣品進行光照處理，光照時間根據材料性能設定（通常為0.5~4小時）；

　　無光對照組需全程避光，其他條件與光催化組一致。

　　4.病毒滴度測定（空斑實驗法）

　　光照結束后，向每個樣品表面加入1mL含1%胎牛血清的PBS，用移液器反復吹吸，洗脫殘留的病毒，收集洗脫液；

　　將洗脫液進行10倍梯度稀釋（從10?到10??），取每個稀釋度的洗脫液0.1mL，分別接種至已長滿單層宿主細胞（如MDCK細胞用于流感病毒，Vero細胞用于SARS-CoV-2）的培養皿中；

　　孵育1小時后，向培養皿中加入含1%瓊脂糖的細胞維持液，覆蓋細胞表面，防止病毒擴散；

　　繼續培養3~7天（根據病毒增殖周期調整），待空斑（病毒感染細胞后形成的透明區域）形成后，用結晶紫染色，計數每個培養皿中的空斑數量，計算病毒滴度（PFU/mL）。

　　5.結果計算與判定

　　抗病毒活性用病毒滅活率表示，計算公式為：

　　病毒滅活率（%）=[1-（光催化組病毒滴度/無光對照組病毒滴度）]×100%

　　判定標準：根據標準要求，當病毒滅活率≥99%（即log??降低值≥2）時，可判定該光催化材料具有顯著的抗病毒活性；若滅活率≥99.9%（log??降低值≥3），則為高效抗病毒材料。